液相色譜不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20%,而80%則需用液相色譜來分析。液相色譜已經(jīng)廣泛應用于藥物的含量測定、組成分析、質量控制等方面。近年來 液相色譜在藥物分析的應用 中占主要地位。
ELSD能夠測定沒有紫外吸收或為紫外末端弱吸收的樣品,天然產物中的許多成分無疑找到了直接、準確的測定方法。ELSD在天然產物及其復方成藥分析中的應用報道主要有皂苷類、生物堿類、萜類內酯等。皂苷無紫外吸收或僅為末端吸收,ELSD能夠對其不經(jīng)衍生進行檢測,在HPLC—ELSD的應用中這方面的報道zui多。主要有一次性分離分析天然人參、生脈散復方、育精膠囊中的多種人參皂苷;西洋參中的人參皂苷和擬人參皂苷定量測定;三七中的三七皂苷的含量分析;黃芪、黃芪注射液和保元湯中的黃芪皂苷、黃芪甲甙的分離和測定;麥冬中的甾體皂甙元;天麻中的天麻甙的含量測定等。這些研究主要采用Cl8柱、乙晴與水作流動相,不經(jīng)衍生直接測定多組分含量,結果顯示方法靈敏度高(一般檢測限低于3μg/m1)、線性關系良好。對于無紫外吸收的生物堿類成分,ELSD同樣顯示出操作簡單、靈敏度高的優(yōu)點。對比HPLC—UV法測定貝母中的甾類貝母生物堿,采用ELSD檢測器,不但不需衍生化操作,提高了結果的準確度,而且可檢測出不含雙鍵的貝母甲素,對動物體內的生物堿類成分如河豚du素,無紫外吸收且安全性低,不適合衍生化法,可用ELSD法進行檢測,獲得滿意結果。銀杏作為一種保健藥品,其主要活性成分為黃酮類和萜類內酯,以往銀杏中的萜類內酯成分主要采用HPLC—UV法和HPLC—RI測定,但由于萜類內酯紫外吸收差,又含少量物質的干擾,結果穩(wěn)定性和準確性較差。隨著ELSD的發(fā)展和普及,這些方法已經(jīng)逐漸被ELSD法所取代。
生產抗生素時,首先要了解發(fā)酵液中的主體與付產物的存在情況。例如:青霉素、四環(huán)素、頭孢子菌素、紅霉素、柔紅霉素、慶大霉素等的發(fā)酵產物,均可用C18柱和甲醇及緩沖液配制的流動相或用離子對法,分析主體及其收產物的含量。對普魯卡因酰胺、茶堿等可進行主體含量的測定,對xiao酸甘油可測定主體含量及其降解產物,以便保證藥物的熱量。
液相色譜法作為藥物分析中的zui主要的分析方法,常被作為常規(guī)分析和檢驗方法。近年來在這個方面的研究比較多,劉樹業(yè)等為時刻監(jiān)控治療肝癌時的抗癌藥物劑量即血中的藥物濃度,提高療效,減少副作用,采用紫外-HPLC法對血中和組織中的阿霉素濃度進行分析。用UV-240紫外分光光度計,BECKMAN332型液相色譜儀,采用反向色譜法。針對近幾年奧委會醫(yī)學委員會公布的禁用表中新增藥物及一系列利尿劑的相關化合物進行了研究,比較了不同的提取方法及回收率,研究了幾種藥物的排泄情況;建立了同時分析13種利尿劑的液相色譜測定方法,檢出限小于5ng。用0.02mol/L的三羥甲基胺基甲烷(用磷酸調pH值至7)和甲醇(含2%乙酸和0.25%庚烷磺酸鈉)作流動相進行梯度洗脫,建立了脂性油膏藥物中黃芩甙含量的反相液相色譜分析方法,本法分析速度快,重現(xiàn)性好,黃芩甙的平均回收率為103.7%。
由于液相色譜能夠對含量復雜組分進行定量分析,被廣泛使用于藥物殘留的測定上。以液相色譜法建立了豬、羊、雞肝組織中西wei因殘留量的檢測方法。采用ODS色譜柱,二極管陣列檢測器,甲醇/水(65/35)為流動相,222nm檢測波長下進行檢測。西wei因對照品溶液的zui低檢測限為0.1mg/L,線性范圍為0.1~20mg/L,標準曲線回歸方程為:y=-22459.83+454684.31x,線性關系良好(r=0.9999)。樣品以乙腈提取,并加入無水硫酸鈉和正已烷,過濾后去除雜質,乙腈層在45~50℃下水浴氮氣吹干,殘渣用甲醇溶解后,進樣分析。平均回收率均大于80%,日間和日內變異系數(shù)均小于10%。符合藥物殘留痕量分析要求。研究了動物源性食品中甲氧芐胺嘧啶藥物殘留的提取、凈化和液相色譜分析條件,建立了液相色譜法測定動物性食品中甲氧芐胺嘧啶藥物殘留的方法,該法檢測限0.025mg/kg,回收率為84%~98%。此外,在人血中藥物含量的測定中也有很多的應用。建立了血漿及尿液中異煙jing的液相色譜快速測定方法,以滿足臨床藥物分析和法醫(yī)學鑒定的需要,提高對血漿及尿液中異煙jing濃度檢測的準確性。以香草醛為衍生化試劑,將異煙jing經(jīng)柱前衍生為異煙jing香草醛腙,直接對處理后樣品中的腙進行定性、定量分析。以在空白人體液樣本中定量添加標準異煙jing的方法考察了樣品的前處理方法、儀器條件、線性范圍、精密度、回收率等,并對健康受試者血液中的異煙jing濃度進行了監(jiān)測。
液相色譜法由于分析速度快、分離效率高、檢測靈敏度高、檢測自動化、適用范圍廣、組分易回收、樣品處理較簡單等優(yōu)點在確定藥方案和治療劑量,以及藥物動力學分析和藥效學評價提供了方法的基礎,有著廣泛的應用前景。